真菌結(jié)構(gòu)復(fù)雜,種類繁多,包括酵母(樣真)菌、絲狀真菌(霉菌)等,除少數(shù)為單細(xì)胞形式外,大多數(shù)由多細(xì)胞組成。

一、真菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)

(一)酵母樣真菌

多呈圓形、卵圓形、香腸形與桿狀等,大小差異很大,5~30微米×1~5微米,不形成真正的菌絲,但如念珠菌屬(又稱假絲酵母屬)的菌形成的芽體可依次連接成絲狀的假菌絲(圖1-4)。酵母菌外層為堅韌的細(xì)胞壁,向內(nèi)依次是細(xì)胞膜與細(xì)胞質(zhì)。細(xì)胞核由核膜包裹,在細(xì)胞質(zhì)中各種細(xì)胞器（圖1-5）。

在固體培養(yǎng)基上，酵母菌菌落與一般細(xì)菌菌落相似，通常表面光滑，濕潤，邊緣整齊。能形成假菌絲的菌，其假菌絲伸入基質(zhì)。

(二)絲狀真菌(霉菌)

絲狀真菌由菌絲與孢子兩部分組成。菌絲由孢子生出的芽管再延伸成絲狀而成,有螺旋狀、球拍狀與鹿角狀等多種形態(tài),直徑約3~10微米。菌絲繼續(xù)生長分枝并交織成叢,即為菌絲體。密布在營養(yǎng)基質(zhì)內(nèi)部的、行吸收營養(yǎng)物質(zhì)功能的稱營養(yǎng)菌絲體;而伸到空氣中的則稱為氣生菌絲體,其中能產(chǎn)生孢子的又稱為繁殖菌絲體。有些真菌菌絲具有隔膜,將菌絲分為若干細(xì)胞,稱為隔膜菌絲,具多細(xì)胞;反之,有些無隔膜的菌絲則為單細(xì)胞,在真菌分類鑒定上這是依據(jù)之一。孢子是真菌的繁殖器官,具有小、輕、干、多及形態(tài)色澤多樣、休眠期長和抗逆強(qiáng)等特征;每個個體產(chǎn)生的孢子成千上萬。這些特征均有助于真菌在自然界散播繁殖。

霉菌菌落形態(tài)較大、干燥、不透明、呈松緊不一的蛛網(wǎng)狀、絨毛狀或棉絮狀,與培養(yǎng)基連接緊密,不易挑取,菌落中心與邊緣、正面與反面的色澤不一致。

二、真菌的繁殖

真菌的孢子形成是其最重要的繁殖方式,根據(jù)孢子形成過程中有無核的融合可分為有性孢子與無性孢子兩類。

1.無性孢子  無性孢子繁殖是指孢子形成無核融合過程,諸如葉狀孢子由菌絲直接形成孢子,包括芽生孢子厚垣孢子和關(guān)節(jié)孢子;分生孢子是指在分化的、專門的菌絲上形成的孢子,可分小分生孢子

和大分生孢子兩種;孢子囊孢子則是由菌絲末端的孢子囊內(nèi)形成的孢子。

2.有性孢子  指在孢子的形成中有細(xì)胞核融合過程,例如接合孢子是由兩條形體相似、性別不同的菌絲相互接觸,隔膜消失后細(xì)胞核融合形成;卵孢子是由兩條大小不同的菌絲,分化為雄性的雄器(形體較小)和雌性的藏卵器(形體較大),結(jié)合發(fā)育形成孢子;子囊孢子則由兩個真菌匯合成子囊,在核融合后再分裂形成擔(dān)孢子是在菌絲形成的膨大結(jié)構(gòu)的末端形成的外出性有性孢子。

三、真菌的分類

通用的真菌分類法將真菌分為4個綱,其特征如下。

(一)藻狀菌綱

菌絲不分隔或不形成真正的菌絲體,細(xì)胞內(nèi)含有許多細(xì)胞核,具有性生殖階段,有性孢子分為接合孢子和卵孢子,無性繁殖的孢子囊孢子形成于孢子囊內(nèi),如毛霉菌、根霉菌等。

(二)子囊菌綱

菌絲分隔,有性階段形成子囊孢子,如麥角菌等。

(三)擔(dān)子菌綱

菌絲分隔,有性階段形成擔(dān)子菌,如銹菌、黑粉菌等。

(四)不完全菌綱

不完全菌綱又稱半知菌綱,菌絲分隔,僅有無性繁殖階段,未發(fā)現(xiàn)有性孢子,引起動物和人疾病的真菌多屬此綱。其中主要是毛癬菌屬、曲霉菌屬、念珠菌屬與小孢子菌屬等(圖1-6)其對外界有極強(qiáng)的抵抗力,對一般消毒劑耐受性很強(qiáng)。

四、真菌的培養(yǎng)

真菌對營養(yǎng)物質(zhì)要求不嚴(yán)格,培養(yǎng)基中應(yīng)含有較多的糖類,需氧,最適pH多在4~6之間,適宜溫度為22~28℃,生長較慢約需數(shù)日至十?dāng)?shù)日方能長成典型菌落。常用的固體培養(yǎng)基為瓊脂培養(yǎng)基,多用于分離培養(yǎng)、菌種保存和研究等。常用的液體培養(yǎng)方法有淺層法與深層通氣法,后者可滿足生長所需的氧氣,多用于生產(chǎn)。

五、真菌病的微生物學(xué)檢查

真菌病多為慢性經(jīng)過,由于真菌侵害部位不同而有淺在侵害性真菌病與深在侵害性真菌病之分。常見的致病性真菌有表皮癬菌屬、小孢癬菌屬、毛癬菌屬、白色念球菌、新型隱球菌、組織胞漿菌、孢子絲菌、芽生菌等。

真菌病的診斷檢查主要是對真菌的形態(tài)特征的鑒定,有些真菌病也可用免疫學(xué)方法檢查診斷。

(一)病料采取

檢查用病料應(yīng)根據(jù)疾病特點選取,諸如被毛、皮膚刮取物、膿汁、分

泌物、體液、排泄物、胎兒胃內(nèi)容物和器官組織等均可用作檢查病料標(biāo)本。

(二)顯微鏡檢查

1.濕標(biāo)本片檢查

(1)水滴壓片法于標(biāo)本上滴加普通水,加上蓋玻片制成壓片,于鏡下直接檢查,但不多用。

(2)氫氧化鉀處理片法多用于膿汁、痰液、被毛、角質(zhì)等病料標(biāo)本。于標(biāo)本上滴加10%~20%氫氧化鉀溶液,加上蓋玻片后作微熱處理,然后鏡檢。

(3)乳酸石炭酸棉藍(lán)液壓片法于標(biāo)本上滴加乳酸石炭酸棉藍(lán)染色液,加上蓋玻片鏡檢,如用針梳理后加蓋玻片鏡檢測更加清晰。本法常用于實驗室。

(4)印度墨汁片法多用以檢查一些真菌(新型隱球菌等)的莢膜。

2.涂片染色片檢查   取濃汁、分泌物、組織及病料離心沉淀物涂片,用姬姆薩染色法等按常規(guī)染色后鏡檢,可見到真菌細(xì)胞、菌絲、孢

子等結(jié)構(gòu)。

(三)分離培養(yǎng)

取病料標(biāo)本接種于加有青霉素20~100國際單位/毫升、鏈霉素40~200微克/毫升的沙氏或改良沙氏培養(yǎng)基,有些深部感染病料還要同時接種血瓊脂培養(yǎng)基,分別置于室溫和37℃下培養(yǎng)并逐日觀察數(shù)日至數(shù)周。然后,挑取菌落作涂(抹)片鏡檢。